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為什么選擇ELISPOT?

更新時(shí)間:2013-06-13點(diǎn)擊次數(shù):1324

ELISPOT斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫分析使細(xì)胞因子分泌過(guò)程更加形象。因?yàn)榧?xì)胞因子圍繞在細(xì)胞周圍,在被上清液稀釋之前,會(huì)和鄰近細(xì)胞表面的受體結(jié)合,或者降解。細(xì)胞因子和GranzemyB ELISPOT實(shí)驗(yàn)是zui有效的體外監(jiān)控CD4或CD8T細(xì)胞抗原的方法。通過(guò)測(cè)定單個(gè)細(xì)胞因子信號(hào)及其頻率,可以建立具有不同集落大小的特殊T細(xì)胞庫(kù)。

ELISPOT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞因子的*優(yōu)勢(shì)
 ☆從1到10,000,000,可以測(cè)量體外細(xì)胞因子的分泌頻率,和ELISA以及四聚體染色、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色相比,具有靈敏度高、特異性好的特點(diǎn)。提高靈敏度非常關(guān)鍵,因?yàn)轶w內(nèi)產(chǎn)生抗原特異性T細(xì)胞的頻率非常低。

 

?☆大批量細(xì)胞分析:可以分析上百個(gè)樣品,檢測(cè)多種抗原。

?☆所需細(xì)胞濃度低。和其他試驗(yàn)方法相比,ELISPOT方法對(duì)細(xì)胞濃度沒(méi)有太高的要求,比如,檢測(cè)600中不同的抗原或肽段只需要45ml血。

?☆可以確定CD4或者CD8抗原決定簇。因?yàn)閷?shí)驗(yàn)所需細(xì)胞量少,實(shí)驗(yàn)靈敏,所有ELISPOT對(duì)于決定簇圖譜的繪制,肽段文庫(kù)的篩選是的選擇。
☆可以建立抗原特異性T細(xì)胞親和函數(shù)

?☆可以研究未經(jīng)藥物處理過(guò)的T細(xì)胞的實(shí)際細(xì)胞因子分泌過(guò)程,T細(xì)胞分泌物下降,則說(shuō)明T細(xì)胞產(chǎn)量減低或者單個(gè)細(xì)胞分泌功能下降。

?☆ELISPOT不破壞淋巴細(xì)胞活性,可以繼續(xù)進(jìn)行細(xì)胞克隆以及低溫儲(chǔ)藏研究
?☆低溫存藏的人淋巴細(xì)胞可以繼續(xù)保持生物學(xué)活性,可以重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟。

ELISPOT是現(xiàn)今研究T細(xì)胞功能,進(jìn)行T細(xì)胞診斷zui有力的工具,ELISPOT的研究已經(jīng)成為一門科學(xué)。

ELISPOT分析儀草案
在病理學(xué)教授Paul V. Lehmann博士帶領(lǐng)下,眾多學(xué)者共同在CWRU大學(xué)通過(guò)了新一代ELISPOT分析儀的認(rèn)證。 zui初ELISPOT是為了檢測(cè)B細(xì)胞分泌抗體而問(wèn)世的,因?yàn)門細(xì)胞分泌細(xì)胞因子而B(niǎo)細(xì)胞產(chǎn)生抗體,新一代的ELISPOT增加了檢測(cè)T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的功能。

ELISPOT分析具有性、客觀性,可重復(fù)性以及自動(dòng)化特點(diǎn),改變了以往ELISA的耗時(shí),結(jié)果不客觀的缺點(diǎn)。

ELISPOT分析儀的出現(xiàn)解決了以下問(wèn)題
?☆哪些斑點(diǎn)是抗原特異性T細(xì)胞產(chǎn)生的(此斑點(diǎn)具有進(jìn)一步分析價(jià)值),哪些是無(wú)關(guān)細(xì)胞產(chǎn)生的(此斑點(diǎn)沒(méi)有T細(xì)胞研究?jī)r(jià)值)
?☆斑點(diǎn)大小的意義
?☆在對(duì)不同細(xì)胞因子計(jì)數(shù)和分析時(shí),如何定義斑點(diǎn)zui大和zui小尺寸

?☆如何從單個(gè)細(xì)胞基礎(chǔ)上分析

?☆實(shí)驗(yàn)度有多高?如果一個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生相似的細(xì)胞因子,在多大程度上會(huì)干擾分析結(jié)果?

?☆幾次重復(fù)實(shí)驗(yàn)才能使結(jié)果更有意義?

ELISPOT:世界*科學(xué)家辛勤勞動(dòng)的果實(shí)
 

ELISPOT分析儀的zui初研究在CWEU大學(xué)開(kāi)始,由26名工作人員,15個(gè)科研工作者,和許多來(lái)自BD、Pharmingen的科學(xué)工作者共同努力下研制成功的,為此CTL也成為美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生院免疫耐受網(wǎng)絡(luò)(ITN)的參考實(shí)驗(yàn)室,專門對(duì)各種ELISPOT臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行測(cè)試。

 

經(jīng)科學(xué)認(rèn)證的ELISPOT分析儀包括三個(gè)分析模式,適用于客戶不同的消費(fèi)水平、研究目的、外圍設(shè)備,附屬軟件和數(shù)據(jù)處理方法。另外,CTL提供圖像分析服務(wù),ELISPOT有自己的網(wǎng)上實(shí)驗(yàn)室,可以提供網(wǎng)絡(luò)培訓(xùn)以及為臨床試驗(yàn)項(xiàng)目按照合同約定提供研究服務(wù)。

EILISPOT:科學(xué)革命

自從CTL發(fā)起ELISPOT革命以來(lái),很多人在借鑒我們的成功經(jīng)驗(yàn)。作為創(chuàng)始人,CTL致力于開(kāi)創(chuàng)ELISPOT新方法并將其提高到科學(xué)的高度。