撰稿　李恩善

免疫血清的制備是一項常用的免疫學(xué)實驗技術(shù)。價、高特異性的免疫血清可作為免疫學(xué)診斷的試劑（如用于制備免疫標(biāo)記抗體等），也可供特異性免疫治療用。免疫血清的效價高低取決于實驗動物的免疫反應(yīng)性及抗原的免疫原性。如以免疫原性強的抗原刺激高應(yīng)答性的機體，常可獲得價的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫時，則需同時加用佐劑以增強抗原的免疫原性。免疫血清的特異性主要取決于免疫用抗原的純度。因此，如欲獲得高特異性的免疫血清，必須予先純化抗原。此外，抗原的劑量、免疫途徑及注射抗原的時間間隔等，也是影響免疫血清效價的重要因素應(yīng)予重視。

　　一、原理

　　具有免疫原性的抗原可刺激機體相應(yīng)B細(xì)胞增殖、分化形成漿細(xì)胞并分泌特異性抗體。由于抗原分子表面的不同決定簇為不同特異性的B細(xì)胞克隆所識別，因此由某一抗原刺激機體后產(chǎn)生的抗體，實際上為針對該抗原分子表面不同決定簇的抗體混合物（即多克隆抗體）。另外，抗體的產(chǎn)生具有回憶應(yīng)答的規(guī)律性，牨m現(xiàn)為初次免疫注射與再次免疫注射后的抗體應(yīng)答特點截然不同。這是由于記憶性B細(xì)胞參與再次應(yīng)答所致。

　　二、免疫方法

　　根據(jù)抗原的性質(zhì)不同而異。下面以制備家兔抗人IgG免疫血清為例作具體說明。

　　1.　用剪刀剪去家兔兩后腳掌的部分兔毛，以酒精及碘酒消毒皮膚；

　　2.　*次免疫: 用2ml注射器吸取弗氏*佐劑（FCA）乳化的抗原（人IgG）下稱FCA-IgG）液1ml，每側(cè)腳掌皮下各注入0.5ml。

　　3.　第二次免疫：間隔10-14天后，于兩側(cè) 窩及鼠蹊部腫大的淋巴結(jié)內(nèi)注入FCA-IgG，每個淋巴結(jié)注0.1ml，其余注入淋巴結(jié)附近皮下共1ml。如淋巴結(jié)未腫大或腫大不明顯時，直接注入兩側(cè)　窩及鼠蹊部皮下。

　　4.　間隔7-10天后，從耳靜脈采血0.5～1.0ml，分離血清，以雙相瓊脂擴散試驗測定免疫血清的抗體效價（即試血）。效價至少應(yīng)達(dá)到1∶16以上時才能放血。

　　5.　若效價未達(dá)到要求，可用不加佐劑的抗原液（人IgG）耳靜脈內(nèi)注射免疫。即于1周內(nèi)注射3次，分別為0.1、0.3、0.5ml。間隔1周再試血。如效價達(dá)到要求應(yīng)立即放血。另外,也可在第2次免疫后，以弗氏不*佐劑（FIA）乳化的抗原（人IgG）（簡稱FIA-IgG）再免疫1-2次。注射部位、劑量和間隔均同第2次，再試血測抗體效價，如效價達(dá)到要求立即放血。

　　三、放血

　?。ㄒ唬⌒呐K采用血法

　　1.　家兔仰面，四肢縛于動物固定架上（或由助手抓住四肢固定）；

　　2.　剪去左胸部兔毛，消毒皮膚；

　　3.　用左姆指摸到胸骨劍突處，食指及中指放在右胸處輕輕向左推心臟，并使心臟固定于左胸側(cè)位置。然后，以左拇指觸摸心臟搏動zui強的部位；

　　4.　用50ml注射器（連接16號針頭），傾針45°角度，對準(zhǔn)心搏zui強處刺入心臟抽血致死；

　　5.　將抽取的血液立即注入無菌三角燒瓶中，待凝固后分離血清。

　?。ǘ☆i動脈放血法

　　1.　家兔仰臥同上固定。頭部略放低以暴露頸部。剃毛及消毒皮膚；

　　2.　沿頸部中線切開皮膚約10cm，分離皮下組織，直至暴露出氣管兩側(cè)的胸鎖乳突肌；

　　3.　分離胸鎖乳突肌與氣管間的頸三角區(qū)疏松組織，暴露出頸總動脈后使之游離；

　　4.　于動脈下套入兩根黑絲線，分別置于遠(yuǎn)心及近心端。結(jié)扎遠(yuǎn)心端的絲線。近心端的動脈用血管夾夾?。?/font>