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全血基因組提取試劑盒

更新時(shí)間:2013-06-17點(diǎn)擊次數(shù):1783
全血基因組提取試劑盒II
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
 
本試劑盒通過(guò)裂解紅細(xì)胞、裂解白細(xì)胞及細(xì)胞核、沉淀蛋白、分離基因組等過(guò)程從全血中提取基因組。試劑盒特點(diǎn):提取的基因組DNA長(zhǎng)度大于20kb, 可用于PCR擴(kuò)增、內(nèi)切酶消化以及膜雜交等;每100ul全血樣品預(yù)期提取量1-5ug;所提基因組DNA效果好;提取過(guò)程不超過(guò)45分鐘;可室溫保存1年。與全血基因組提取試劑盒(I)不同的是裂解紅細(xì)胞及有核白細(xì)胞同時(shí)進(jìn)行,省去了多個(gè)步驟,復(fù)合裂解液中含有抑制DNA酶的成分,在加熱(65°C)狀態(tài)下,可保證完整的基因組DNA的充分裂解釋放,異丙醇沉淀時(shí),罕見(jiàn)渾濁的蛋白質(zhì)雜質(zhì)共沉淀。本試劑盒提供100次100ul全血樣本基因組提取的足量試劑。 本試劑盒也可用于培養(yǎng)細(xì)胞,組織基因組以及培養(yǎng)細(xì)菌或真菌基因組DNA的提取。
 
試劑盒組成
1、細(xì)胞復(fù)合裂解液:35ml                            2、蛋白沉淀液: 25ml×1瓶
3、DNA溶解液: 5ml瓶                                4、說(shuō)明書(shū): 1份
自備試劑
本試劑盒沒(méi)有提供,但*的試劑包括:異丙醇(國(guó)產(chǎn)分析醇);70%乙醇。
樣品
1、 樣品要求:用于DNA提取的全血應(yīng)為抗凝血(EDTA, 肝素或檸檬酸鈉抗凝),抗凝血在4°C存放5天以?xún)?nèi)(存放時(shí)間長(zhǎng),DNA產(chǎn)量低),-20°C存放一個(gè)月以?xún)?nèi), -80°C至少可存放2年均能純化出高質(zhì)量的DNA(凍存血較新鮮血產(chǎn)量低)。
2、 全血需求量:本試劑盒可一次提取少至20-300ul,多至10ml的全血DNA,標(biāo)準(zhǔn)提取量為100ul。
 
注:血液及組織標(biāo)本應(yīng)視為傳染性材料處理。
操作程序以100ul全血為例)
1、 細(xì)胞復(fù)合裂解液置65°C水浴中使其中的結(jié)晶溶解。
2、 吸取100ul混勻的全血至1.5ml離心管中,加入結(jié)晶成分已溶解的細(xì)胞復(fù)合裂解液300ul,混璇器震蕩混勻20秒,置65°C水浴中反應(yīng)20分鐘。
3、 加入200ul蛋白沉淀液,上下顛倒5-6次使兩者混勻。


 

4、 13000-16000×g,離心3-5分鐘。
 
5、 將上清液(約500ul)轉(zhuǎn)移至新的離心管中,加入等體積異丙醇,此時(shí)可見(jiàn)透明的絮狀物,混勻后離心,同步驟4,傾去上清。
6、 加入200ul 70%的乙醇溶液(基因組DNA在70%乙醇中,存于-80 C,可長(zhǎng)期保存),來(lái)回倒置,清洗管壁,離心,同步驟4。
7、 移去70%乙醇,倒置離心管于干凈的濾紙上,自然干燥10-15分鐘,加入33ul DNA溶解液??焖黉鰷u震蕩1-2秒,使DNA溶解液沖刷到所有沉淀的DNA。
8、 65 C水浴1小時(shí),或4 C過(guò)夜使DNA充分溶解(要求不嚴(yán)格的PCR試驗(yàn)可縮短時(shí)間或省去該步),輕輕彈動(dòng)管壁有助于溶解。


 

 
各種容積全血基因組DNA提取所需的溶液組份量


 
 
全血量
復(fù)合裂解液量
蛋白沉淀液量
異丙醇量
70%乙醇量
DNA溶解液量
100 ul
300 ul
200 ul
500 ul
200 ul
33 ul
300ul
3x300 ul
3x 200 ul
3x500ul
3x200ul
3x33 ul