BD 產(chǎn)品貨號(hào)：354259

儲(chǔ)存和運(yùn)輸：-20度儲(chǔ)存，干冰運(yùn)輸。

操作指南：

層粘連蛋白/巢蛋白混合物是EHS小鼠腫瘤基質(zhì)膜的主要成分。純化后，成等摩爾濃度分布。二價(jià)陽(yáng)離子有利于混合物的形成。在2mg/mL濃度時(shí)，層粘連蛋白/巢蛋白可以形成三維膠，可用于細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的研究。三維膠更接近體內(nèi)微環(huán)境。細(xì)胞的分化受到與單一或混合細(xì)胞外基質(zhì)蛋白之間的相互作用的影響，因此在層粘連蛋白/巢蛋白混合物上培養(yǎng)細(xì)胞，可以用以觀察并揭示細(xì)胞分化和功能性的特性機(jī)理。混合蛋白的成膠過(guò)程對(duì)溫度敏感。此外，高濃度的層粘連蛋白/巢蛋白（2-6mg/mL）也用于人下頜腺泡細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的血管形成研究。

注意事項(xiàng)：

所有操作的工作溫度不能高于4℃，蛋白需冰上操作保存，用冰塊冷卻的溶液或細(xì)胞懸浮液稀釋。由于混合蛋白溶液粘性較高，必須使用預(yù)冷的注射器型移液管，如Gilson M系列；避免使用氣壓式移液管或吸頭。

推薦包被方法：

鋪膠步驟：細(xì)胞在膠表面培養(yǎng)

冰上溶解混合蛋白，所有操作均在冰浴上進(jìn)行。稀釋到需要的濃度：穩(wěn)定成膠濃度至少為3.5mg/mL。用預(yù)冷的等壓鹽溶液或0.1mM鈣離子培養(yǎng)基稀釋。將稀釋的蛋白溶液加入到培養(yǎng)器皿，1-2小時(shí)，37℃成膠。

鋪膠步驟：細(xì)胞在膠內(nèi)部培養(yǎng)

冰上溶解混合蛋白，所有操作均在冰浴上進(jìn)行。根據(jù)加樣體積計(jì)算并稀釋混合蛋白，成膠濃度至少為3.5mg/mL，稀釋過(guò)程需在預(yù)冷的培養(yǎng)器皿或小管中進(jìn)行。加入預(yù)冷的細(xì)胞懸液，用等壓鹽溶液或培養(yǎng)基調(diào)節(jié)溶液濃度到第二步所需的濃度。系列移液管混勻混合蛋白和細(xì)胞懸液。將混合后的細(xì)胞蛋白懸液加入到預(yù)冷的培養(yǎng)板中，37℃孵育1-2小時(shí)成膠。